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“單槍匹馬”伏癌菌,免疫親和柱新上市

更新時(shí)間:2022-11-02 點(diǎn)擊次數(shù):1384

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   01、概述


伏馬菌素 (Fumonisin FB) 是一種霉菌毒素,是由串珠鐮刀菌(Fusarium moniliforme Sheld)產(chǎn)生的水溶性代謝產(chǎn)物,是一類由不同的多氫醇和丙三羧酸組成的結(jié)構(gòu)類似的雙酯化合物。伏馬菌素主要污染糧食及其制品,并對(duì)某些家畜產(chǎn)生急性毒性及潛在的致癌性,有報(bào)道指出,伏馬菌素主要損害肝腎功能,能引起馬腦白質(zhì)軟化癥和豬肺水腫等,并與我國(guó)和南非部分地區(qū)高發(fā)的食道癌有關(guān),現(xiàn)已引起世界范圍的廣泛注意。已成為繼黃曲霉毒素之后的又一研究熱點(diǎn)。




月旭科技新推出伏馬毒素(B1/B2/B3)免疫親和柱,適合于和HPLC或LC-MS結(jié)合使用,定量檢測(cè)FB1、FB2和FB3。適用于糧谷、飼料等樣本中的伏馬毒素凈化處理,提高了樣品的純度,純化后的提取液可用于不同的分析方法測(cè)定。



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 02、原理

凈化的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng),伏馬毒素單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠介質(zhì)上,樣品中的伏馬毒素經(jīng)過(guò)提取、過(guò)濾、稀釋,然后將樣品提取液緩慢通過(guò)伏馬毒素免疫親和柱,在免疫親和柱內(nèi),伏馬毒素與抗體結(jié)合,洗滌液通過(guò)免疫親和柱除去未被結(jié)合的雜質(zhì)。最后采用甲醇-乙酸洗脫伏馬毒素,然后進(jìn)行相關(guān)分析。

03、化步驟


1)準(zhǔn)確稱取20g(精確至0.01g)粉碎的樣品;

2)先加入50mL樣品提取液混合,搖床振蕩提取30min,于4000r/min,離心5min,取出上清液于試劑瓶中;

3)將底部沉淀部分再加入50mL樣品提取液混合,以搖床振蕩提取30min,于4000r/min,離心5min,取出上清液,與前面的上清液合并混勻;

4)準(zhǔn)確移取10mL上清液,加入40mL 1.5%吐溫20-PBS稀釋,用玻璃微纖維濾紙過(guò)濾,至濾液澄清,備用。

5)準(zhǔn)確移取15mL混勻?yàn)V液(相當(dāng)于0.6g樣品)過(guò)親和柱。

6)3mL柱管上方堵頭直接連接20mL針筒固定后使用(柱管內(nèi)偶見有小氣泡屬正常現(xiàn)象,不影響親和柱的使用);

7)準(zhǔn)確移取上述混勻?yàn)V液,注入注射器中,調(diào)節(jié)針筒壓力使其以2秒/滴的速度緩慢通過(guò)免疫親和柱;

8)先用10mL PBS沖洗柱子,再用3mL水沖洗柱子,棄去流出液,流速1秒/滴,直至2~3mL空氣通過(guò)柱體,保證柱子內(nèi)沒有殘余液體;

9)準(zhǔn)確加入3.0mL洗脫液洗脫,流速自然重力,直至2~3mL空氣通過(guò)柱體,保證柱子內(nèi)沒有殘余液體。收集全部洗脫液,進(jìn)行相關(guān)測(cè)定。

(注意:整個(gè)純化過(guò)程盡量不要讓柱子干燥?。?/strong>

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04、色譜條件

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流動(dòng)相配置


流動(dòng)相A :移取0.2mL 甲酸,加水至200mL混勻,經(jīng)0.22μm濾膜抽濾,即得;


流動(dòng)相B:分別移取200mL色譜級(jí)乙腈和甲醇,混勻,經(jīng)0.22μm濾膜抽濾,即得。


質(zhì)譜條件


離子源:ESI;

檢測(cè)方式:MRM;

干燥氣:氮?dú)猓?50℃;

流速:1000L/Hr;

碰撞氣:氬氣;

離子噴霧電壓:1.0kV。

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05、譜圖展示

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06、結(jié)果展示

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【 產(chǎn)品信息 

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